RNA 降解：樣本保存不當(dāng)，如未及時低溫保存或反復(fù)凍融，會使 RNA 發(fā)生降解。降解的 RNA 會導(dǎo)致 RIN 值降低，影響實驗準(zhǔn)確性，因為 Qubit RNA IQ Assay Kit 是基于完整 RNA 的熒光信號來評估其質(zhì)量和濃度的。

樣本污染：實驗過程中，如果使用了被 RNase 污染的耗材、試劑或?qū)嶒灜h(huán)境，會導(dǎo)致 RNA 被降解或產(chǎn)生假陽性結(jié)果。此外，樣本中存在的蛋白質(zhì)、鹽離子、有機溶劑等雜質(zhì)也會干擾熒光染料與 RNA 的結(jié)合，影響檢測準(zhǔn)確性。

樣本濃度過高或過低：樣本濃度超出試劑盒的檢測范圍，過高會使熒光信號飽和，無法準(zhǔn)確測量；過低則會導(dǎo)致熒光信號微弱，誤差增大。

試劑過期或變質(zhì)：試劑盒中的試劑都有一定的保質(zhì)期，過期或保存條件不當(dāng)導(dǎo)致試劑變質(zhì)，會使熒光染料的性能發(fā)生改變，無法與 RNA 正常結(jié)合，從而影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

試劑混合不均勻：在將 Qubit RNA IQ 染料與樣本混合時，如果沒有充分混勻，會導(dǎo)致染料與 RNA 結(jié)合不充分，熒光信號不穩(wěn)定，影響濃度和質(zhì)量指標(biāo)的準(zhǔn)確性。

儀器未校準(zhǔn)：Qubit 儀器若未定期校準(zhǔn)，其光學(xué)系統(tǒng)、熒光檢測模塊等可能出現(xiàn)偏差，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。例如，儀器的波長準(zhǔn)確性發(fā)生偏移，會使熒光信號的檢測出現(xiàn)誤差。

儀器故障：儀器的部件故障，如光源老化、檢測器故障等，會影響熒光信號的正常檢測。光源老化會使激發(fā)光強度不足，導(dǎo)致熒光信號減弱，進(jìn)而影響測量結(jié)果。

加樣不準(zhǔn)確：使用移液器加樣時，如果操作不規(guī)范，如吸液速度過快、移液器量程選擇不當(dāng)、吸頭內(nèi)有氣泡等，會導(dǎo)致加入的樣本或試劑體積不準(zhǔn)確，影響實驗結(jié)果。

孵育時間和溫度不當(dāng)：染料與 RNA 的結(jié)合需要一定的孵育時間和合適的溫度條件。孵育時間過短或過長、溫度過高或過低，都會影響染料與 RNA 的結(jié)合效率，從而影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

檢測環(huán)境不穩(wěn)定：實驗環(huán)境的溫度、濕度、光照等條件不穩(wěn)定，可能會對熒光信號產(chǎn)生影響。例如，溫度變化較大時，熒光染料的熒光量子產(chǎn)率可能會發(fā)生改變，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。