在細胞生物學(xué)研究、藥物研發(fā)以及毒理學(xué)評價等領(lǐng)域，準(zhǔn)確評估細胞活力是探索細胞生理病理機制、篩選藥物活性成分、判斷化合物毒性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。CCK-8（Cell Counting Kit-8）細胞活力檢測試劑盒憑借其檢測原理、良好的性能優(yōu)勢及簡便的操作流程，成為科研工作者常用的細胞活力檢測工具。
一、檢測原理
CCK-8 細胞活力檢測試劑盒的核心原理基于線粒體中的脫氫酶活性。在活細胞內(nèi)，線粒體中的多種脫氫酶（如琥珀酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶等）能夠?qū)⑼庠葱缘乃苄运倪螓} WST-8（化學(xué)名稱：2-(2 - 甲氧基 - 4 - 硝基苯基)-3-(4 - 硝基苯基)-5-(2,4 - 二磺酸苯)-2H - 四唑單鈉鹽）還原為橙黃色的甲臜（formazan）產(chǎn)物 。細胞活力與線粒體脫氫酶活性密切相關(guān)，活細胞數(shù)量越多、代謝越旺盛，線粒體脫氫酶活性越高，催化還原產(chǎn)生的甲臜量也就越多。生成的甲臜可直接溶解于細胞培養(yǎng)基中，其在 450nm 波長處具有特征吸收峰，通過酶標(biāo)儀測定該波長下的吸光度值（OD 值），即可間接反映細胞數(shù)量與活力水平 。而死細胞由于線粒體功能受損，脫氫酶活性喪失，無法使 WST-8 發(fā)生還原反應(yīng)，不產(chǎn)生或僅產(chǎn)生極少量甲臜。
二、產(chǎn)品性能優(yōu)勢
（一）高靈敏度與準(zhǔn)確性
CCK-8 試劑盒能夠檢測到低至幾十細胞的活力變化，對細胞數(shù)量的微小改變具有良好的響應(yīng)性。其檢測過程中，甲臜生成量與活細胞數(shù)量在較寬的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系 。例如，在細胞密度為 1×103 - 1×10?個 /mL 的區(qū)間內(nèi)，吸光度值與細胞數(shù)量呈顯著線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)通?？蛇_ 0.98 以上，這使得科研人員能夠通過標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確推算樣本中的細胞活力與數(shù)量，為細胞增殖、凋亡等研究提供精確的數(shù)據(jù)支持 。與其他細胞活力檢測方法（如 MTT 法）相比，CCK-8 法生成的甲臜產(chǎn)物水溶性好，無需額外的溶解步驟，避免了因溶解導(dǎo)致的檢測誤差，進一步提高了檢測的準(zhǔn)確性。
（二）操作簡便，節(jié)省時間
CCK-8 試劑盒的操作流程相對簡潔。實驗時，只需向培養(yǎng)的細胞中直接加入適量的 CCK-8 試劑，在細胞培養(yǎng)箱中孵育 1 - 4 小時（根據(jù)細胞類型和實驗條件調(diào)整），即可直接使用酶標(biāo)儀測定吸光度 。無需像 MTT 法那樣，在反應(yīng)結(jié)束后進行棄液、洗滌、溶解甲臜等繁瑣操作，極大地縮短了實驗時間，提高了實驗效率。對于大規(guī)模樣本檢測或高通量篩選實驗，CCK-8 法的操作簡便性優(yōu)勢尤為明顯，能夠顯著減少實驗人員的工作量。
（三）良好的細胞相容性與安全性
CCK-8 試劑中的 WST-8 是一種水溶性四唑鹽，對細胞的毒性較低，在常規(guī)檢測濃度下，短時間內(nèi)不會影響細胞的正常生理功能和代謝活動 。在連續(xù)多天使用 CCK-8 試劑對細胞進行活力檢測的實驗中，細胞的生長曲線未出現(xiàn)明顯異常，表明該試劑不會對細胞的長期培養(yǎng)和后續(xù)實驗產(chǎn)生顯著干擾 。此外，與含有有機溶劑（如 DMSO）的 MTT 法相比，CCK-8 法無需使用有機溶劑溶解甲臜，減少了有機溶劑對細胞的潛在毒性作用和對實驗人員健康的危害，同時也降低了實驗操作過程中的安全風(fēng)險。
（四）適用范圍廣
CCK-8 試劑盒適用于多種類型細胞的活力檢測，包括貼壁細胞（如 HeLa 細胞、HepG2 細胞）、懸浮細胞（如 Jurkat 細胞、K562 細胞） ，以及原代細胞（如原代神經(jīng)元細胞、原代肝細胞）。無論是哺乳動物細胞，還是昆蟲細胞等其他物種來源的細胞，均可采用該試劑盒進行活力評估。在實驗應(yīng)用方面，可用于細胞增殖實驗，監(jiān)測細胞在不同培養(yǎng)條件或藥物處理下的生長情況；也可用于細胞毒性檢測，評估化學(xué)物質(zhì)、納米材料、病毒等對細胞活力的影響；還可用于細胞凋亡研究，判斷細胞在特定刺激下的死亡比例 。
三、實驗操作流程與注意事項
（一）實驗操作流程
細胞接種：根據(jù)實驗?zāi)康?，將處于對?shù)生長期的細胞用胰酶消化后，調(diào)整細胞懸液濃度，接種于 96 孔細胞培養(yǎng)板中，每孔接種體積通常為 100 μL，細胞接種數(shù)量根據(jù)細胞類型和實驗要求確定，一般為 1×103 - 1×10?個 / 孔 。將培養(yǎng)板置于細胞培養(yǎng)箱中（37℃，5% CO?），培養(yǎng) 24 小時，使細胞貼壁或適應(yīng)懸浮培養(yǎng)環(huán)境。
藥物處理（如需）：若實驗涉及藥物處理，在細胞培養(yǎng) 24 小時后，向各孔中加入不同濃度梯度的藥物溶液，同時設(shè)置空白對照組（只加培養(yǎng)基）和陽性對照組（加入已知具有細胞毒性的藥物），每組設(shè)置 3 - 5 個復(fù)孔 。將培養(yǎng)板繼續(xù)置于細胞培養(yǎng)箱中孵育相應(yīng)時間（根據(jù)實驗設(shè)計確定，一般為 24 - 72 小時）。
加入 CCK-8 試劑：孵育結(jié)束后，每孔加入 10 μL CCK-8 試劑，輕輕振蕩培養(yǎng)板，使試劑與培養(yǎng)基充分混勻 。將培養(yǎng)板放回細胞培養(yǎng)箱中，繼續(xù)孵育 1 - 4 小時。在此過程中，可每隔 1 小時觀察一次，當(dāng)甲臜顏色達到合適深度且吸光度值處于檢測線性范圍內(nèi)時，停止孵育。
吸光度測定：使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測定各孔的吸光度值（OD 值）。若樣本背景值較高，可同時測定 600 - 650nm 波長處的吸光度值，用 450nm 處的 OD 值減去 600 - 650nm 處的 OD 值，以消除背景干擾 。
（二）注意事項
細胞狀態(tài)把控：確保用于實驗的細胞處于良好的生長狀態(tài)，選擇對數(shù)生長期的細胞進行接種，避免使用老化或生長異常的細胞，否則會影響細胞活力檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性 。在細胞傳代過程中，嚴(yán)格控制傳代次數(shù)，一般建議在 10 代以內(nèi)使用。
試劑使用規(guī)范：CCK-8 試劑應(yīng)避光保存于 4℃冰箱中，使用前需平衡至室溫。避免試劑反復(fù)凍融，以免影響 WST-8 的活性 。使用時，盡量減少試劑在空氣中的暴露時間，防止被氧化。
孵育條件優(yōu)化：CCK-8 試劑的孵育時間會因細胞類型、細胞密度和代謝活性的不同而有所差異。對于代謝較慢的細胞，可能需要適當(dāng)延長孵育時間；而對于代謝旺盛的細胞，孵育時間可適當(dāng)縮短 。在進行新的細胞系檢測或開展預(yù)實驗時，建議設(shè)置不同的孵育時間梯度，確定最佳孵育時長。
避免干擾因素：實驗過程中，應(yīng)避免使用含酚紅的培養(yǎng)基，因為酚紅在 450nm 波長附近有吸收峰，會干擾甲臜的吸光度測定 。若必須使用含酚紅的培養(yǎng)基，需設(shè)置空白孔（只加培養(yǎng)基和 CCK-8 試劑）進行對照，以扣除酚紅的影響。此外，一些具有還原性的化合物（如維生素 C、DTT 等）可能會與 WST-8 發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致吸光度值異常，在藥物處理實驗中需注意藥物成分對檢測結(jié)果的潛在干擾。
CCK-8 細胞活力檢測試劑盒憑借其科學(xué)的檢測原理、突出的性能優(yōu)勢和便捷的操作流程，為細胞活力評估提供了可靠的解決方案。在生命科學(xué)研究與生物醫(yī)藥領(lǐng)域，合理運用該試劑盒能夠幫助科研人員更準(zhǔn)確地獲取細胞活力數(shù)據(jù)，推動相關(guān)研究的深入開展。
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